T100 PCR儀(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀)是分子生物學(xué)領(lǐng)域中用于體外擴(kuò)增特定DNA片段的核心設(shè)備，通過模擬DNA自然復(fù)制過程，在數(shù)小時內(nèi)將微量DNA樣本擴(kuò)增至數(shù)百萬至數(shù)十億倍，被廣泛應(yīng)用于基因檢測、疾病診斷、科研探索及工業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域。
 

　　T100 PCR儀通過精確控制反應(yīng)體系的溫度變化，驅(qū)動DNA變性、退火、延伸三個關(guān)鍵步驟的循環(huán)進(jìn)行，具體過程如下：
 

　　變性(Denaturation)：
 

　　溫度升至94-98℃，持續(xù)20-30秒，使DNA雙鏈解旋為單鏈，為后續(xù)引物結(jié)合提供模板。
 

　　退火(Annealing)：
 

　　溫度降至50-65℃(依引物Tm值調(diào)整)，持續(xù)20-40秒，特異性引物與單鏈DNA的互補區(qū)域結(jié)合，標(biāo)記擴(kuò)增起點。
 

　　延伸(Extension)：
 

　　溫度升至72℃(Taq DNA聚合酶最適溫度)，持續(xù)30秒至2分鐘，聚合酶沿引物方向合成新鏈，完成DNA復(fù)制。
 

　　循環(huán)次數(shù)：通常進(jìn)行25-40個循環(huán)，每輪循環(huán)DNA數(shù)量呈指數(shù)增長(理論擴(kuò)增倍數(shù)=2n，n為循環(huán)數(shù))。
 

　　根據(jù)功能與設(shè)計差異，PCR儀可分為以下類型：
 

　　1.傳統(tǒng)梯度PCR儀
 

　　特點：通過金屬塊均勻加熱/冷卻，配備梯度溫度模塊，可同時設(shè)置不同退火溫度，快速優(yōu)化反應(yīng)條件。
 

　　應(yīng)用：適合引物設(shè)計初期，篩選最佳退火溫度(如基因克隆、突變體篩選)。
 

　　2.實時熒光定量PCR儀(qPCR)
 

　　核心升級：集成熒光檢測系統(tǒng)，實時監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物積累，實現(xiàn)定量分析。
 

　　技術(shù)分支：
 

　　SYBR Green法：熒光染料嵌入DNA雙鏈，非特異性檢測所有擴(kuò)增產(chǎn)物。
 

　　探針法(TaqMan)：使用特異性熒光探針，僅標(biāo)記目標(biāo)序列，靈敏度達(dá)1-10拷貝/μL。
 

　　應(yīng)用：病毒載量檢測(如HIV、HPV)、基因表達(dá)分析、SNP分型等。
 

　　3.數(shù)字PCR儀(dPCR)
 

　　原理創(chuàng)新：將反應(yīng)體系分割為數(shù)萬個微反應(yīng)單元(如微滴、芯片孔)，通過終點法統(tǒng)計陽性單元比例，實現(xiàn)絕對定量。
 

　　優(yōu)勢：無需標(biāo)準(zhǔn)曲線，抗干擾能力強，可檢測低至0.001%的突變頻率。
 

　　應(yīng)用：液體活檢(循環(huán)腫瘤DNA檢測)、轉(zhuǎn)基因成分定量、環(huán)境微生物監(jiān)測等。