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BD流式細胞儀Z常見的幾種檢測方式

更新時間:2017-08-07瀏覽:2700次
  一、BD流式細胞儀測定用乙醇固定的DNA的含量
  1、培養細胞的DNA含量的測定
  制備單細胞懸液于200μl的PBS緩沖液中;加入2ml預冷的70%乙醇,4℃保存;
  細胞固定的一般步驟為:
  1)取單細胞懸液1~2×106個細胞于PBS(PH=7.2)緩沖液中;
  2)300g離心5分鐘,棄上清,反復兩次;
  3)重懸細胞于0.5ml PBS緩沖液中;
  4)將細胞懸液放置于2~3ml冷70%乙醇中,混勻,保存于4℃,至少30分鐘。在4℃條件下可保存2~3周。
  注意:
  ·根據實驗的要求,固定劑也可選用1~3%多聚甲醛;
  ·將乙醇作為固定劑時,乙醇應預冷至0~4℃;
  ·細胞在固定時,固定劑應緩慢滴入細胞懸液中,使固定劑的濃度緩慢增加,并不斷震搖,以免細胞成團。
  ·300g離心5分鐘,去上清,再重懸于400μl PBS中;
  ·顯微鏡下觀察,若有明顯的黏附,須再用篩網過濾;
  ·加入PI,避光孵育30分鐘;
  ·上BD流式細胞儀檢測。
  2、新鮮組織的DNA含量的測定
  1)用200mg濕重組織用機械法制成單細胞懸液;
  2)500g離心5分鐘;
  3)棄上清,重懸于10ml染色-去污劑中;
  4)再過濾,用200目的篩網或70~80μm的篩網過濾;
  5)上BD流式細胞儀檢測。
  3、石蠟包埋組織切片的DNA含量的測定
  1)從石蠟包埋切取切片50μm厚,2~3片,制成單細胞懸液;
  2)用PBS緩沖液洗滌,500g離心5分鐘,棄上清;
  3)加入PI液1ml室溫避光30分鐘;
  4)調整細胞濃度為1×106/ml;
  5)上BD流式細胞儀檢測。
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